关于疯牛病及其检测试剂盒简介
项目名称:关于疯牛病及其检测试剂盒简介
成果单位：中国科学院微生物研究所
检索用关键词：疯牛病、检测、试剂盒
专利状况：1
专利申请号：03130685.3
应用行业：B
技术领域：2
技术产品用途介绍：微生物所分子病毒室在国家948项目“疯牛病和羊骚痒病检疫用单克隆抗体细胞株的引进和分子构象检测技术的建立”和973项目“蛋白质功能、三维结构和折叠原理研究”资金支持下，分别对我国肉牛[1]和小尾寒羊[2]朊蛋白(PrPC)进行基因构建表达纯化和二级结构研究[3-4]并制备了牛b PrPC抗血清，用以检测羊骚痒病获得成功（与疯牛病同源性很高，也可检测疯牛病），实现了免疫印迹法诊断疯牛病和羊骚痒病的国产化[5]。对酵母朊病毒结构域Ure2p1-65的构象转变进行了研究，将Ure2p1-65的构象转变进行了研究。将Ure2p1-65与谷胱苷肽-硫-转移酶（GST）融合表达。结果表明Ure2p1-65可非特异性地改变其融合蛋白的空间结构，获得类似致病型朊病毒PrPSC的性质，包括抵抗蛋白酶K消化能力显著增强等[6-7]。
目前疯牛病检测中区分正常型朊蛋白（PrPC）和致病型朊病毒（PrPSC）的主要依据是前者对蛋白酶消化敏感而后者具有较强的抵抗性。标准的阳性对照为感染疯牛病等海绵状脑病的脑组织提取物，来源极其有限并具有感染性，在使用、保存和运输中必须受到严格监控。这显然不适合我国国情。因此必须找到一种安全而又廉价的阳性对照替代品并应用到实际中去，以保证疯牛病检测方法的准确性和可靠性。这将是我国广大基层检疫部门、海关等监控疯牛病疫情和杜绝可疑污染源入境的关键技术[6]。
结合上述工作基础和实际需求，拟将牛正常朊蛋白（bPrPC）和酵母朊病毒结构域（Ure2p1-65）融合表达，实现牛朊蛋白的人工构象转变，并获得抵抗蛋白酶消化的能力。除理论研究上意义外，得到的融合变构体可作为阳性对照替代品应用于疯牛病的检测。我们将制备的阳性替代物属基因工程产品，本身无感染危险性，适于大量生产；便于确定合适的蛋白酶消化浓度，可避免操作中假阳性或假阴性结果。其依据如下：1. 细菌表达的b PrPC –Ure2p1-65无PrPSC感染必需的糖基磷酸肌醇化等转录后修饰。2. b PrPC –Ure2p1-65的构象转变属Ure2p1-65依赖型，体内增殖环境为低等生物，与人体和哺乳动物相差甚远。3. bPrPC –Ure2p1-65的构象转变本质上属突变类。至今通过点突变，缺失等手段产生的PrPC突变体可发生构象转变，但证实均无感染性。4. b PrPC –Ure2p1-65已经过蛋白变性和复性处理。证据表明即便是PrPSC经过上述处理也不能恢复其致病性。
研究将进一步完善和发展已建立的免疫印迹法诊断疯牛病方法，包括牛朊蛋白抗血清的大量制备、抗体IgG的纯化等。最终将牛朊蛋白抗体、阳性对照替代品、阴性对照组装成试剂盒，以期应用于疯牛病的检疫和可疑污染源的鉴定。
已申请专利（专利申请号：03130685.3）。 产品性能：近年来疯牛病已由欧洲传播到了亚洲，日本已发现六例患疯牛病的牛，我国急需建立疯牛病检测方法，通过严格检疫，杜绝疯牛病发生，保证我国养牛业的发展，是国民经济的一个重要问题。
市场前景及经济效益分析：为加强对疯牛病的检测与监控，我们已建立了一疯牛病病原诊断体系，目前已完成阳性对照替代品的设计、制备和应用；牛朊蛋白高效价抗体的制备与IgG纯化；检测试剂盒的组装与试用；为达到产业化要求，需大批量制备牛朊蛋白抗体IgG，阳性对照替代品，确定具体操作标准和注意事项。
国内现在没有单位申请疯牛病毒检测试剂盒，国家检疫部门建立了两个检测实验室（北京和青岛出入境检疫局），但没有成熟的检测方法。
疯牛病现已从欧洲蔓延至日本和加拿大，日本造成2000亿日元损失。我国应从“非典”突发事件中吸取教训，及早开展疯牛病检测，不要等到暴发后再亡羊补牢。
成果权属：1
项目来源：1
转化方式：1, 2, 3, 5, 7
成果状态：9
成果单位详细信息:
关于疯牛病及其检测试剂盒简介项目单位所在地区：北京
通讯地址：北京海淀中关村北一条13号
邮政编码：100080
项目负责人姓名：田波
职务职称：研究员
联系电话：010-62554247
项目联系人姓名：楼晓东
所在部门：科技处
电话：010-62553059
手机：--
传真：010-62560912
成果单位：中国科学院微生物研究所
检索用关键词：疯牛病、检测、试剂盒
专利状况：1
专利申请号：03130685.3
应用行业：B
技术领域：2
技术产品用途介绍：微生物所分子病毒室在国家948项目“疯牛病和羊骚痒病检疫用单克隆抗体细胞株的引进和分子构象检测技术的建立”和973项目“蛋白质功能、三维结构和折叠原理研究”资金支持下，分别对我国肉牛[1]和小尾寒羊[2]朊蛋白(PrPC)进行基因构建表达纯化和二级结构研究[3-4]并制备了牛b PrPC抗血清，用以检测羊骚痒病获得成功（与疯牛病同源性很高，也可检测疯牛病），实现了免疫印迹法诊断疯牛病和羊骚痒病的国产化[5]。对酵母朊病毒结构域Ure2p1-65的构象转变进行了研究，将Ure2p1-65的构象转变进行了研究。将Ure2p1-65与谷胱苷肽-硫-转移酶（GST）融合表达。结果表明Ure2p1-65可非特异性地改变其融合蛋白的空间结构，获得类似致病型朊病毒PrPSC的性质，包括抵抗蛋白酶K消化能力显著增强等[6-7]。
目前疯牛病检测中区分正常型朊蛋白（PrPC）和致病型朊病毒（PrPSC）的主要依据是前者对蛋白酶消化敏感而后者具有较强的抵抗性。标准的阳性对照为感染疯牛病等海绵状脑病的脑组织提取物，来源极其有限并具有感染性，在使用、保存和运输中必须受到严格监控。这显然不适合我国国情。因此必须找到一种安全而又廉价的阳性对照替代品并应用到实际中去，以保证疯牛病检测方法的准确性和可靠性。这将是我国广大基层检疫部门、海关等监控疯牛病疫情和杜绝可疑污染源入境的关键技术[6]。
结合上述工作基础和实际需求，拟将牛正常朊蛋白（bPrPC）和酵母朊病毒结构域（Ure2p1-65）融合表达，实现牛朊蛋白的人工构象转变，并获得抵抗蛋白酶消化的能力。除理论研究上意义外，得到的融合变构体可作为阳性对照替代品应用于疯牛病的检测。我们将制备的阳性替代物属基因工程产品，本身无感染危险性，适于大量生产；便于确定合适的蛋白酶消化浓度，可避免操作中假阳性或假阴性结果。其依据如下：1. 细菌表达的b PrPC –Ure2p1-65无PrPSC感染必需的糖基磷酸肌醇化等转录后修饰。2. b PrPC –Ure2p1-65的构象转变属Ure2p1-65依赖型，体内增殖环境为低等生物，与人体和哺乳动物相差甚远。3. bPrPC –Ure2p1-65的构象转变本质上属突变类。至今通过点突变，缺失等手段产生的PrPC突变体可发生构象转变，但证实均无感染性。4. b PrPC –Ure2p1-65已经过蛋白变性和复性处理。证据表明即便是PrPSC经过上述处理也不能恢复其致病性。
研究将进一步完善和发展已建立的免疫印迹法诊断疯牛病方法，包括牛朊蛋白抗血清的大量制备、抗体IgG的纯化等。最终将牛朊蛋白抗体、阳性对照替代品、阴性对照组装成试剂盒，以期应用于疯牛病的检疫和可疑污染源的鉴定。
已申请专利（专利申请号：03130685.3）。 产品性能：近年来疯牛病已由欧洲传播到了亚洲，日本已发现六例患疯牛病的牛，我国急需建立疯牛病检测方法，通过严格检疫，杜绝疯牛病发生，保证我国养牛业的发展，是国民经济的一个重要问题。
市场前景及经济效益分析：为加强对疯牛病的检测与监控，我们已建立了一疯牛病病原诊断体系，目前已完成阳性对照替代品的设计、制备和应用；牛朊蛋白高效价抗体的制备与IgG纯化；检测试剂盒的组装与试用；为达到产业化要求，需大批量制备牛朊蛋白抗体IgG，阳性对照替代品，确定具体操作标准和注意事项。
国内现在没有单位申请疯牛病毒检测试剂盒，国家检疫部门建立了两个检测实验室（北京和青岛出入境检疫局），但没有成熟的检测方法。
疯牛病现已从欧洲蔓延至日本和加拿大，日本造成2000亿日元损失。我国应从“非典”突发事件中吸取教训，及早开展疯牛病检测，不要等到暴发后再亡羊补牢。
成果权属：1
项目来源：1
转化方式：1, 2, 3, 5, 7
成果状态：9
成果单位详细信息:
关于疯牛病及其检测试剂盒简介项目单位所在地区：北京
通讯地址：北京海淀中关村北一条13号
邮政编码：100080
项目负责人姓名：田波
职务职称：研究员
联系电话：010-62554247
项目联系人姓名：楼晓东
所在部门：科技处
电话：010-62553059
手机：--
传真：010-62560912